格艾特帶您了解常規的組織培養技術

　　植物細胞和組織培養的技術性強,要求無菌操作,通過本實驗可初步掌握常規的組織培養技術,加深對無菌操作的了解.

　　植物的全能性：植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力,稱為植物的全能性.

　　植物組織培養就是利用植物的全能性進行離體無菌植物培養的一門技術.植物組織培養按其原始意義,就是指愈傷組織培養.但發展至今,其范圍日益擴大,已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養.因此,擁有幾種不同水平的培養技術,即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養技術.它們的涵義是：

　　1.植株培養.指以具備完整植株形態的材料(如幼苗和較大的植株)外植體的無菌培養.

　　2. 胚胎培養.指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養.

　　3. 器官培養.指以植物的根,莖,葉,花,果等器官為外植體的離體無菌培養,如根的根尖和切段,莖的莖尖,莖節和切段,葉的葉原基,葉片,葉柄,葉鞘和子葉,花器的花瓣,雄蕊(花藥,花絲),胚珠,子房,果實等的離體無菌培養.

　　4. 組織培養.指以分離出植物各部位的組織(如分生組織,形成層,木質部,韌皮部,表皮,皮層,胚乳組織,薄壁組織,髓部等),或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無菌培養.這是狹義的組織培養.

　　5. 細胞培養.指以單個的游離細胞(如用果酸酶從組織中分離的體細胞,或花粉細胞,卵細胞)為接種體的離體無菌培養.

　　6. 原生質體培養.指以除去細胞壁的原生質體為外植體的離體無菌培養.

　　儀器設備：

　　1.酒精燈、100ml三角燒瓶,9厘米培養皿;

　　2.鑷子、剪刀、解剖針;

　　3.雙筒解剖顯微鏡;

　　4.光照培養箱或溫室;

　　材料和試劑：

　　1.材料 煙草無菌苗、豌豆幼苗.

　　2.試劑

　　(1)MS培養基,植物激素：NAA、6-BA等;

　　(2)飽和漂白粉液(次氯酸鈉);

　　(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

　　(4)無菌水

　　實驗步驟：

　　1.煙草無菌苗的快速切繁—繼代培養：(要求完全無菌操作)

　　每組一瓶煙草無菌苗,請細心操作,以免污染.

　　(1) 在實驗臺上,點著酒精燈,將雙手用酒精棉球擦拭消毒,打開生長好無菌煙草苗的三角瓶,三角瓶的瓶口使用前后需在酒精燈外焰上燒過滅菌.

　　(2) 用滅菌的鑷子輕輕捏出1株幼苗,用滅菌的剪刀將無菌苗剪成0.5-1厘米的小段,要求每段至少包含一個生長點,直接剪入盛有MS培養基的三角瓶中,每一個切段必須直接接觸培養基,三角瓶口重新燒過滅菌,并重新封好口.

　　(3) 在光照培養箱中15~25℃,16小時光照條件下培養4周,可長成完整植株,能用于田間移栽.

　　2.豌豆苗的莖尖培養

　?、? 取發芽6天的豌豆幼苗10株,簡取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無菌)用無菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養皿中.

　?、?在雙目解剖鏡下,用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐,用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐.

　?、?將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養基上誘導愈傷組織形成,用封口膜將培養皿封好.在恒溫培養箱中,26℃下,培養六周,形成愈傷組織,經繼代后,可用于生根培養.