?? 作者:創始人?? 發布時間:2022-08-12 17:07:13?? 瀏覽次數:5
1. 培養基架配制注意事項
植物組織培養最常用MS培養基,包含十幾種化合物。有些化合物相遇會發生化學反應產生沉淀,影響培養基的營養成分,所以MS培養基需要配制多種高倍母液。
配制母液時,尤其涉及大量元素的母液時,一定要等一種成分溶解之后,再緩慢的添加另一種成分;切記一鍋煮,即不能將各種化合物一齊添加進去。
2. 滅菌后培養基不凝膠或者凝膠偏軟
植物凝膠、瓊脂都對酸性條件敏感,pH 值低于5很難成膠或凝膠偏軟,切記高壓滅菌前調節培養基 pH 值(5.5 - 6.0)。植物凝膠對二價陽離子濃度有要求,也就是相對于 MS 培養基,1 / 2 MS 培養基中植物凝膠要適當增加用量。
另外滅菌后,倒出培養基前一定將培養基搖勻(帶防燙手套),因為瓊脂密度大底層含量高,容易造成培養基強度不均勻。
3. 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,在使用過程中有無區別?
水解酪蛋白對胚狀體、不定芽的分化有良好的促進作用,通常用量在 500 mg/L,不管是酸解還是酶解,作用都是一樣的,酶解更有利于發揮其作用。
4. 怎么溶解組培常用植物激素?
IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等應先溶解于少量 95% 的乙醇中,再加水定容配制成母液。
如有結晶析出,可考慮用 1 / 10 體積的乙醇溶解后再定容;2,4 -D 易溶于堿性水溶液,可用少量 1mol/L 的 NaOH 溶液溶解后再慢慢加水定容;KT 和 6 -BA 先用少量的 HCL 溶解,再加水定容到一定的濃度。
5. 細胞分裂素使用濃度?
一般情況下在培養基中加入 0.1~10.0 mg/L 的細胞分裂素(6 -BA/KT/ZT),多數用 1.0~2.0 mg/L,KT 濃度為 0.5~2 mg/L,濃度要根據實驗材料來調整。細胞分裂素可以單獨使用也可以與細胞生長素配合使用。
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